Introduction
Les kits midi d'ADN plasmidique Hipure Fastfilter combinent la puissance de la technologie Hipure avec la cohérence éprouvée de la lyse alcaline-SDS des cellules bactériennes pour fournir un ADN de haute qualité. Les colonnes d'ADN Hipure facilitent les étapes de liaison, de lavage et d'élution, permettant ainsi le traitement simultané de plusieurs échantillons.
Ce système comprend également une cartouche filtrante spéciale qui remplace l'étape de centrifugation après la lyse alcaline. L'ADN plasmidique purifié par ce système est adapté au séquençage automatisé de l'ADN fluorescent, à la digestion par endonucléase de restriction, à la transfection de cellules de mammifères et à d'autres manipulations. Jusqu'à 250 µg d'ADN plasmidique à nombre de copies élevé ou 10-75 µg d'ADN plasmidique à nombre de copies faible peuvent être purifiés à partir de 15-50 mL de culture de nuit.
Caractéristiques techniques
Fonctionnalités | Caractéristiques techniques |
Fonctions principales | Isolement jusqu'à 250 μg d'ADN plasmidique à partir d'une culture bactérienne de 30 à 50 ml |
Applications | Digestion enzymatique, séquençage, PCR et marquage, etc |
Méthode de purification | Colonne de spin midi |
Technologie de purification | Technologie de silice |
Méthode de traitement | Manuel (centrifugation ou vide) |
Type d'échantillon | Plasmide conventionnel, plasmide de moins de 30 Ko |
Quantité d'échantillon | 30 ml |
Rendement | 50 µg |
Volume d'élution | ≥ 300 μl |
Temps par passage | ≤ 60 minutes |
Volume de liquide porteur par colonne | 4 ml |
Limite de la colonne | 250µg |
Principe
La procédure plasmide Hipure est basée sur la lyse alcaline des cellules bactériennes, suivie par l'adsorption de l'ADN sur la silice en présence de sel élevé. La membrane unique en silice utilisée dans le kit remplace complètement les boues de verre ou de silice pour les miniprpes d'ADN plasmidique.
La procédure se compose de 3 étapes de base: Préparation et élimination d'un lysat bactérien par méthode alcaline,
puis transfert du surnageant dans la colonne pour lier l'ADN. Après lavage des protéines et autres impuretés, l'acide nucléique a finalement été élué avec un tampon à faible teneur en sel (Tris 10 mm, pH9.0, EDTA 0,5 mm).
Avantages
Contenu | P101302 | P101303 |
Temps de purification | 25 Preps | 100 Preps |
RNase A | 10 mg | 40 mg |
Tampon P1 | 80 ml | 300 ml |
Tampon P2 | 80 ml | 300 ml |
Tampon LEN3 | 40 ml | 150 ml |
Tampon GBT | 60 ml | 250 ml |
Tampon PW1 | 60 ml | 250 ml |
Tampon PW2 | 20 ml | 100 ml |
Tampon d'élution | 30 ml | 120 ml |
Colonnes Hipure DNA midi III | 25 | 100 |
Seringue midi transparente de lysat | 25 | 100 |
Tubes de prélèvement de 15 ml | 50 | 200 |
Nom | N° CAT | Quantité d'échantillon | Type de colonne | Elutiovolume | Rendement | Durée de fonctionnement du chronomépeur | Exigences relatives à la centrifugeuse |
MiniKit plasmidique Hipure | P1001 | 1-5ml | colonne de 1,5 ml | 30 μl | 5 µg/5ml | ≤ 30 minutes | petite centrifugeuse |
Mini-kit II plasmidique Hipure | P1002 | 5 ml | colonne de 1,5 ml | 75 μl | 20 µg/15 ml | ≤ 30 minutes | petite centrifugeuse |
Kit Hipure Plasmid plus 96 | P1006 | 1-1,5 ml | plaque à 96 puits | 70 μl | 1-15μg /1 ml | ≤ 60 minutes | centrifugeuse pour plaques 96 puits |
Kit midi plasmidique Hipure Fastfilter | P1013 | 30 ml | colonne de 15 ml | 0.3-0,8 ml | 50 µg/50 ml | ≤ 60 minutes | centrifugeuse 15 ml |
Kit Hipure Fastfilter Plasmid Maxi | P1014 | 100 ml | colonne de 50 ml | 0.5-1,5 ml | 0.4-1mg/200ml | ≤ 60 minutes | centrifugeuse 50 ml |