Introduction
La protéinase K est une sérine protéase stable avec une large spécificité de substrat. Il se dégrade beaucoup de protéines dans l'état natif, même en présence de détergents. Il n'est pas activé par metalions, agents chélatants (par exemple, l'EDTA), les réactifs sulfhydryles, ou par la chymotrypsine tripsinor inhibiteurs. Il est stable sur une large gamme de pH (4-12.5), avec l'activité optimale à pH 6.5-9.5. Activité peut être stimulée par l'addition de la dénaturation des agents (SDS et urée). La dénaturation de la rapide de l'enzyme se produit à une température supérieure à 70°C. L'autolyse de l'enzyme se produit de plus en plus à un pH alcalin.
Cependant, la protéinase K n'est pas complètement inactivée par l'autolyse. Certains fragments de l'enzyme de continuer à maintenir leur activité protéolytique complète, même après de vastes l'autolyse.
La protéinase K est fréquemment utilisé dans les applications de biologie moléculaire à digérer les protéines indésirables, tels que les nucléases dans l'ADN ou ARN Préparations de micro-organismes, les cellules cultivées, et de plantes. L'enzyme est généralement utilisé à 50-200 μg/ml dans les préparations d'acide nucléique à un pH de 7,5-8,0 et 37-55°C. Temps d'incubation varient de 30 minutes à 18 heures.
Spécifications
Fonctionnalités | Spécifications |
Le poids moléculaire | 29,3 kDa |
Point isoélectrique | 8.9 |
L'apparence | Poudre lyophilisée blanche |
La pureté | 95 % (SDS-PAGE analyse) |
L'activité spécifique | ≥34 unités/mg protéine |
Caractéristique de température | L'activité efficace est la température de 37-70°C, et l'activité enzymatique à 65 °C est deux fois qu'à 25 °C. |
Caractéristiques de PH | 4.0-12.0, la plage optimale est ph7.5-11.5 |
Conditions de conservation |
Il est recommandé de conserver à -20 °C pour assurer la stabilité de l'activité à la plus grande mesure (température normale de transport ou de stockage ne réduira pas l'activité enzymatique). La durée de vie est jusqu'à 3 ans à -20 °C et 2 ans à 2~8°C. |
Méthode d'utilisation |
Préparer 20mg/ml avec de la solution, ajouter la protéinase K à la solution de digestion ou de lysat jusqu'à la concentration finale est 50-200ug/ml, et incuber à 55~70°C. La protéinase K après réaction peuvent être enlevés ou inactivée par la méthode de billes magnétiques, la colonne méthode ou du phénol/chloroforme l'extraction. La protéase K peuvent être inactivés par incubation à 95 °C pendant 3 minutes ou 70 °C pendant 15 minutes. |
L'acide nucléique de détection de résidus |
Qubit n'a pas de détecter La contamination de l'ADN humain non détectés (PCR en temps réel) L'ADN bactérien de la contamination non détecté (16s'amorce universelle PCR, 30 cycles) La contamination de l'ADN fongique non détectés (SA) PCR d'apprêt |
Détection de la nucléase |
La DNase non détecté La RNase non détecté Nickase non détecté |
Application recommandée | L'acide nucléique, circulant d'extraction extraction d'ADN, virus de l'extraction des acides nucléiques |
Avantages
Table des matières | C12100 | C12101 | C12102 |
La protéinase K, Lyophilizate, >30 unités/mg de protéine | 1 g | 10 g | 100 g |
Le tampon PBD (20mM de Tris, pH 7,5, 10mM de CaCl 2 , 50% de glycérol, 0,1 % Agents de conservation) | 1000 ml | 1000 ml | 1000 ml |