Ce kit de test est utilisé pour le test qualitatif in vitro Détection de mutations communes dans les exons 18-21 de l'EGFR gène dans les échantillons de patients humains non-petits cellules de cancer de poumon (Reportez-vous au Tableau 1 pour plus de détails)

PRINCIPE DE TEST

Ce kit de détection utilise une solution d'enrichissement PCR, la technologie ARMS (amplification Retrient mutation system) et la méthode combinée TaqMan pour détecter les mutations L858R, 19del et d'autres mutations EGFR courantes. En enrichissant les sites de mutation par PCR, la résolution et la sensibilité de la détection sont encore améliorées. Les sondes TaqMan sont étiquetées avec un fluorophore marqueur FAM et un fluorophore quencher BHQ2. Lorsque la sonde est intacte, le signal fluorescent émis par le groupe de rapporteurs est absorbé par le groupe de trempe ; Pendant l'amplification PCR, l'activité exonucléase 5'-3' de l'enzyme Taq cligne et dégrade la sonde, ce qui permet de séparer le groupe fluorescent du marqueur et le fluorophore de désactivation afin que le système de surveillance de fluorescence puisse recevoir le signal de fluorescence. La solution d'enrichissement PCR réduit la séquence de fond de type sauvage par la digestion enzymatique de restriction et améliore encore la résolution et la sensibilité de la détection. Les caractéristiques de la méthode ARMS: Taq ADN polymérase, qui n'a pas d'activité exonucléase 3'-5', peut reconnaître spécifiquement l'extrémité 3'de l'amorce. Ce n'est que lorsque l'extrémité 3'de l'amorce est complètement assortie que le fragment au site de mutation peut être amplifié normalement. Lorsque l'extrémité 3 pi de l'apprêt est mal assortie, il ne peut pas être amplifié de façon efficace. Par conséquent, l'utilisation de cette méthode peut amplifier sélectivement la séquence mutante, et la sonde TaqMan est combinée avec le produit amplifié pour identifier la séquence cible de la mutation.
La zone de détection choisie par la solution de réaction de contrôle interne est un segment relativement conservateur sur l'exon 2 du gène EGFR humain, environ 120 PB, comme contrôle de la qualité des réactifs, de la qualité de l'ADN et de l'opération elle-même. Même si l'ADN est dégradé, le contrôle interne peut vraiment réagir au système. Quantité effective d'ADN dans le gène.
Le système de détection contient une certaine proportion de dUTP, dNTP et uracile ADN glycosylase (enzyme UDG), cette enzyme (également appelée uracile-N-glycosylase ou UNG enzyme) peut interrompre la PCR contenant le produit dUTP, empêchant ainsi efficacement la contamination par PCR.