Le clonage moléculaire T4 KIT DE L'ADN ligase

N° de Modèle.
G3340-100
Content
Standard
Usage
Réactifs de Laboratoire, Réactifs Analytique, Réactif d′Enseignement
Habit Appellation
Réactif spécial
Demande
Industrie, Recherche Scientifique
Propriété
Réactif biochimique
stockage
-20ºc
période de validité
12 mois
ma
1 jeu
mots-clés
DNA Ligase
Paquet de Transport
Carton
Spécifications
500U
Marque Déposée
Servicebio
Origine
China
Prix de référence
$ 20.70 - 31.50
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Description de Produit

Introduction :
T4 DNA ligase peut catalyser le collage des collants ou blunt-clos-ADN double brin ou l'ARN entre le 5'-P fin et le 3'-OH fin avec une liaison phosphodiester. En même temps, l'enzyme peut également réparer à un seul brin d'entailles dans l'ADN double brin, de l'ARN et ADN/ARN chaînes hybride.
Définition d'activité : une unité d'enzyme peut catalyser 1 nmol de 32P-étiquetées dans l'ATP de pyrophosphate par réaction de déplacement dans les 20 minutes à 37 °C (une unité est égale à environ 200 unités de pièce jointe à la fin de collants).

T4 DNA ligase   tampon de stockage: 20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 50 mM de KCl, 1 mM de DTT, 50 % (v/v) glycérol.
5×T4 DNA ligase: 250 mM Tampon Tris-HCl (pH 7,6), 50 mM de MgCl 2 , 5 mM ATP, 5 mM de DTT, d'enhancer.

Stockage et transport
Transports en commun avec  la glace humide ; stockage à -20 °C, valide pour 12 mois.
Le numéro de composant L'organe G3340-50 G3340-100
G3340-1 T4 DNA ligase 250 U (50 μL) 500 U (100 μL)
G3340-2 5×T4 DNA ligase Buffer 1 mL 2×1 mL
Manuel utilisateur 1
La ligature des conditions de réaction

La réaction de ligature à 25 °C pour les extrémités adhésives prend 5-30 minutes; la réaction de ligature à 25 °C pour les extrémités émoussé ne dépasse pas 2 heures ou de la réaction à 4 °C pendant la nuit.

La conversion des produits de ligature

1. Retirer les cellules compétentes (telles que l'E.coli DH5α, E.coli Top10, etc.) de l'-80ºC d'un réfrigérateur et de les placer sur la glace à dégeler;

2. Ajouter l'a réagi l'échantillon à l'État compétent, déplacez doucement le fond du tube avec vos doigts à mélanger, et une baignoire dans la glace pendant 30 minutes;

3. Placez ensuite le produit dans un bain d'eau 42ºC à un choc thermique pour 90 s. Après qu'il est de plus, le placer sur la glace rapidement pour 2-5 min dans un bain de glace;

4. Prendre 900 μL de solution stérile SOC ou lb de moyenne et l'ajouter à l'EP tube. Après mélange, placer le tube pour PÉ sur un agitateur et incuber à 220 tr/min à 37 °C pendant 1 heure pour réanimer les bactéries (il peut également être placé dans un 37°C Incubateur. Placer la culture pendant 1 h);

5. Selon les exigences expérimentales, dessiner différents volumes de transformer les cellules compétentes et les ajouter à la LB milieu solide contenant les antibiotiques, propagation des cellules de façon uniforme, et après le liquide est complètement absorbé, placer la plaque à l'envers dans l'Incubateur 37°C et de cultiver la nuit.


Identification de clones positifs

Les anticorps monoclonaux colonies cultivées sur la plaque sont choisis pour la colonie d'identification de la PCR, ou après la culture, le plasmide est extrait par restriction de la digestion ou PCR, ou l'extrait d'identification de plasmide est séquencé et analysé directement pour l'identification.

Précautions

1. Il est recommandé de configurer le système de réaction sur la glace.

2. Lorsque la concentration du vecteur et le fragment de cible est faible, il n'est pas nécessaire d'ajouter l'eau et l'utiliser directement à rattraper.

3. Il est recommandé que le rapport molaire de l'ADN vecteur d'ADN inséré fragment est de 1:3~1:10.

4. Une petite quantité de précipitations dans les 5 × T4 DNA ligase tampon est normale. Il peut être dissoute à 37 °C avant de l'expérience, et il sera utilisé après le mélange soigneusement. Il y a aucun effet sur l'expérience ; il est recommandé de se dissoudre dans des aliquotes et le gel d'utilisation.

5. T4 DNA ligase est recommandé d'être prises lorsque utilisé et de mettre Retour à -20ºC immédiatement après utilisation.

6. Lorsque l'électroporation est utilisé pour la transformation, la ligature produit doit être purifié par la méthode de la colonne ou de méthode de précipitation de l'éthanol.

7. Lorsque la connexion de l'blunt-terminé à l'ADN vecteur fragment, le vecteur doit être déphosphorylée (G3400 est recommandé) pour empêcher son auto-circularization.

8. Veuillez porter blouse de laboratoire et des gants jetables pendant le fonctionnement.
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Réactif Chimique

AQUAWIND.JP, 2023