Introduction
Le mini-kit Hipure Plasmid EF associe la puissance de la technologie Hipure à la technologie innovante d'élimination des endotoxines de Magen pour fournir un ADN plasmidique de haute qualité avec de faibles niveaux d'endotoxines, avant utilisation dans la transfection eucaryote et les expériences in vitro.
Le système sans endo plasmide Hipure utilise un tampon spécialement formulé qui empêche les molécules d'endotoxine de se lier à la surface de la matrice Hipure. La contamination par endotoxines réduit l'efficacité de la transfection des lignées cellulaires sensibles à l'endotoxine. Pour la thérapie génique, la contamination par les endotoxines devrait être d'une importance majeure puisque les endotoxines peuvent causer de la fièvre, provoquer le syndrome de choc endotoxine et interférer avec la transfection in vitro dans les cellules immunitaires.
Caractéristiques techniques
Fonctionnalités | Caractéristiques techniques |
Fonctions principales | Isolement jusqu'à 70 µg d'ADN plasmidique exempt d'endotoxines provenant de bactéries de 10 à 15 ml la culture |
Applications | Transfection cellulaire, injection animale, etc |
Méthode de purification | Mini-colonne de rotation |
Technologie de purification | Technologie de silice |
Méthode de traitement | Manuel (centrifugation ou vide) |
Type d'échantillon | Plasmide conventionnel |
Quantité d'échantillon |
Plasmide à copie élevée : milieu de culture de 10 ml Plasmide à faible nombre de copies : milieu de culture de 10 ml |
Rendement | 10 μg |
Volume d'élution | ≥75 μl |
Temps par passage | ≤ 40 minutes |
Volume de liquide porteur par colonne | 800 μl |
Limite de la colonne | 70 μg |
Principe
La procédure plasmide Hipure est basée sur la lyse alcaline des cellules bactériennes, suivie par l'adsorption de l'ADN sur la silice en présence de sel élevé. La membrane unique en silice utilisée dans le kit remplace complètement les boues de verre ou de silice pour les miniprpes d'ADN plasmidique. La procédure se compose de 3 étapes de base: Préparation et élimination d'un lysat bactérien par méthode alcaline, puis transfert du surnageant dans la colonne pour lier l'ADN. Après lavage des protéines et autres impuretés, l'acide nucléique a finalement été élué avec un tampon à faible teneur en sel (Tris 10 mm, pH9.0, EDTA 0,5 mm).
Avantages
Contenu du kit
Contenu | P115402 | P115403 |
Temps de purification | 50 Preps | 250 Preps |
RNase A | 5 mg | 20 mg |
Tampon P1 | 30 ml | 140 ml |
Tampon P2 | 30 ml | 140 ml |
Tampon LEN3 | 15 ml | 70 ml |
Tampon LN4 | 50 ml | 250 ml |
Tampon LN5 | 30 ml | 140 ml |
Tampon PW1 | 30 ml | 140 ml |
Tampon PW2 | 12 ml | 50 ml |
Tampon d'élution | 15 ml | 30 ml |
Mini-colonnes ADN Hipure III | 50 | 250 |
Tubes de prélèvement de 2 ml | 50 | 250 |